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Ist es notwendig VisiSens Sensorfolien mit Zelladhäsion-fördernden Proteinen zu beschichten, und wie macht man das?
Wenn Sie O2 Sensorfolien mit der optischen Isolierschicht (OIW) als Zellsubstrat benutzen, empfehlen wir eine Beschichtung (nach der Anleitung unten) um die Zelladhäsion zu fördern. Für SF-RPSu4 ohne OIW und für SF-HP5R ist eine Beschichtung nicht zwingend erforderlich.
Die nachfolgende Tabelle listet alle Zelllinien auf, deren Adhäsion an SF-RPSu4 und SF-HP5 getestet wurde:
| Sensormaterial | Zelltyp | Konfluente Zellschicht (nach 24 Std.) | Beschichtung |
|---|---|---|---|
| O2: SF-RPSu4-OIW | MDCK II | Nein | Empfohlen |
| O2: SF-RPSu4 ohne OIW | MDCK II | Ja | Nicht zwingend erforderlich |
| O2: SF-RPSu4 ohne OIW | NRK | Ja | Nicht zwingend erforderlich |
| O2: SF-RPSu4 ohne OIW | BAEC | Ja | Nicht zwingend erforderlich |
| O2: SF-RPSu4 ohne OIW | U-373 | Ja | Nicht zwingend erforderlich |
| pH: SF-HP5R | MDCK II | Ja | Nicht zwingend erforderlich |
Anleitung für Beschichtung von Sensorfolien:
- Befestigen Sie die Sensorfolie mit dem mitgelieferten Silikonkleber oder Hochvakuum-Schmierfett in Ihrem Kulturgefäß (z. B. Petrischale, Wellplatte oder Deckglas), oder benutzen Sie selbstklebende Sensorfolien. Wenn Sie den Silikonkleber verwenden, lassen Sie diesen bitte für 24 Std. aushärten. Spülen Sie danach die Oberfläche mit Wasser oder Puffer, um die Essigsäure, die während des Aushärtens freigesetzt wird, zu entfernen.
- Geben Sie dann die Beschichtungslösung auf die Sensorfolie und lassen Sie diese für 1 Std. bei der unten aufgelisteten Temperatur einwirken. Stellen Sie bitte sicher, dass die Beschichtungslösung die gesamte Sensorfolie bedeckt. Beachten Sie, dass das Einweichen der pH Sensorfolie (Hydrogel) extra Zeit in Anspruch nimmt, die zur Beschichtungszeit hinzugerechnet werden muss.
- Saugen Sie die Beschichtungslösung nach 1 Std. ab und geben Sie Ihre Zellen in das Kulturgefäß.
| Beschichtungsmaterial | Konzentration | Inkubationsbedingungen |
|---|---|---|
| Kulturmedium | mit 5 % (v/v) Serum | 1 Std., 37 °C, 5 % CO2 |
| Fötales Kälberserum (FCS) | pur | 1 Std., 37 °C, 5 % CO2 |
| Fibronectin (aus humanem Plasma) | 25 µg/ml | 1 Std., Raumtemperatur |
| Gelatine | 0.5 % (w/v) | 1 Std., 37 °C, 5 % CO2 |
| Poly-L-lysin | 100 µg/ml | 1 Std., Raumtemperatur |